油脂受到光、熱、空氣中氧的作用,發生酸敗反應,分解出醛、酸之類的化合物。丙二醛就是分解產物的一種,它能與TBA(硫代巴比妥酸)作用生成粉紅色化合物,在532nm波長處有吸收高峰,利用此性質即能測出丙二醛含量,從而推導出油脂酸敗的程度。
2 試劑
2.1 TBA水溶液:準確稱取TBA(硫代巴比妥酸)0.288g溶于水中,并稀釋至100ml(如TBA不易溶解,可加熱至全溶澄清,然后稀釋至100ml),相當于0.02mol/L;
2.2 三氯乙酸混合液:準確稱取三氯乙酸(分析純)7.5g及0.1gEDTA,用水溶解,稀釋至100ml;
2.3 氯仿(分析純);
2.4 丙二醛標準溶液:稱取0.315g1,1,3,3-四乙氧基丙烷,溶解后稀釋至1000ml,此溶液每ml相當于丙二醛100μg,置于冰箱內保存。準確吸取10ml,稀釋至100ml,此溶液每ml相當于丙二醛10μg,備用。
3 操作步驟
(1)標準曲線的繪制
準確吸取每相當于丙二醛10μg的標準溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml置于納氏比色管中,加水至總體積為5ml,加入5mlTBA溶液,然后按樣品測定步驟進行,測得光密度繪制標準曲線。
(2)樣品測
準確稱取融化均勻的油脂樣品10g,置于100ml有蓋三角瓶內,準確加入50ml三氯乙酸混合液,振搖半小時(保持油脂融溶狀態,如冷結即在70℃水浴上略微加熱使之融化后繼續振搖)用雙層濾紙過濾,除去油脂。濾液重復用雙層濾紙過濾一次。
準確移取上述濾液5.00ml置于25ml比色管內,加入5.00mlTBA溶液,混勻,加塞,置于90℃水浴內保溫40min,取出,室溫冷卻1h,搖勻,靜置2min,于532nm波長比色,對照標準曲線得到微克數(同時作空白試驗)。
4 計算
丙二醛含量(mg/kg)=C*50/M*5
式中C—從標準曲線查得丙二醛的微克數(ug)
m---樣品質量(g)